近年来，原发性肝癌(HCC) 发病率不断升高，我国的发病人数约占全球的55%，在恶性肿瘤相关死亡中居第二位。目前研究的热点之一是恶性肿瘤靶向治疗，CD117、C-erbB-2及EGFR等已被证实在多种恶性肿瘤中表达[1,2]，它们参与调节肿瘤细胞增殖的信号转导过程，以其为靶点的分子靶向药物如Gleev、Herceptin、Iressa、Tarceva等已用于临床，在胃肠间质瘤、肺癌等治疗中已取得不错效果[3,4]。我们通过免疫组化法检测原发性肝癌组织中CD117、C-erbB-2及EGFR表达，结合临床资料和肿瘤形态和生物学特性，探讨其在肝癌诊断、预后判断和治疗中的意义。北京大学人民医院肝胆外科王东

资料和方法

1．一般资料：2004年11月至2006年12月收治的原发性肝癌患者127例，其中男112例，女15例，年龄 (51.7±12.6) 岁。术前检测血清AFP阳性率为62.2% (79/127)，其中86例接受原位肝移植手术，余41例接受部分肝切除手术，所有病例均经病理证实为原发性肝癌。CD117、C-erbB-2及EGFR抗体及SP免疫组化检测试剂盒购自福州迈新生物技术公司。

2．肿瘤形态、病理及TNM分期：127例肝癌中单个肿瘤61例，两个肿瘤24例，而3个及3个肿瘤以上的42例；合并门静脉分支或主干癌栓的36例；肿瘤最大直径＜3cm的35例，直径介于3cm和5cm之间的54例，直径＞5cm的38例；病理组织学分型为：高分化肝细胞癌46例，中分化肝细胞癌49例，低分化肝细胞癌32例；按照国际抗癌联盟(International Union Against Cancer, UICC)制定的TNM分期标准：上述127例HCC患者中I期29.1% (37/127)，II期35.4% (45/127)，III期21.3%(27/127)，IV期14.2%(18/127)。

3．检测方法：肿瘤标本采用10%甲醛固定，石蜡包埋切片，根据不同抗体的要求对组织抗原进行相应的修复，按照试剂盒说明的具体步骤进行操作，按照胞膜或胞质免疫组化染色结果判定。

4．统计学方法：采用SPSS 10.0统计软件分析，数据用  ± s表示，进行多因素方差分析。

结  果

1．CD117、C-erbB-2及EGFR的染色结果：CD117阳性染色为棕黄色细颗粒状，定位于肝癌细胞的胞质中，阳性染色细胞呈散在或片状分布，127例患者中有41例 (32.3%) 呈阳性染色(图1)；C-erbB-2阳性染色为棕黄色粗颗粒状，定位于肝癌细胞的胞膜和胞质中，阳性染色细胞呈散在或团块状分布，127例患者中有29例 (22.8%) 呈阳性染色(图2)；EGFR阳性染色为棕黄色细颗粒状，定位于肝癌细胞的胞膜和胞质中，阳性染色细胞呈团块状分布，127例患者中有35例 (27.6%) 呈阳性染色(图3)。

图1                       图2                      图3

图1.CD117在肝癌组织中的染色，放大倍数400；图2. C-erbB-2在肝癌组织中的染色，放大倍数400；图3. EGFR在肝癌组织中的染色，放大倍数400

2．肿瘤多因素分析结果：通过影像学资料分析、术中判断及术后病理检查，收集所有127例患者的肿瘤形态和生物学特性资料，包括：肿瘤数目、直径、血管侵犯与否、组织分化和AFP水平等。采用统计软件对CD117、C-erbB-2及EGFR染色阳性率和肿瘤资料进行多因素方差分析，结果发现：CD117阳性表达主要见于数目超过3个、直径 > 5cm和血管受侵犯者，而与AFP水平和肿瘤分化程度无明显相关(表1)；C-erbB-2阳性表达则与肿瘤直径、血管受侵和肿瘤分化程度明显相关，与肿瘤数目和AFP水平无明显相关(表2)；EGFR阳性表达则与肿瘤数目、AFP水平和肿瘤分化程度明显相关，与血管受侵和肿瘤直径无明显相关(表3)。

表1.   CD117阳性表达与HCC临床病理间的关系

肿瘤特征

CD117染色

阴性例数

阳性例数

P值

肿瘤数目

1

50

11

2

17

7

≥3

19

23

<0.05**

肿瘤直径

<3

29

6

(cm)

3~5

44

10

>5

13

25

<0.05**

门静脉癌栓

无

75

16

有

11

25

<0.05**

肿瘤分化程度

高

31

15

中

33

16

低

22

10

>0.05

AFP*

阴性

34

14

阳性

52

27

>0.05

注：*  AFP阳性为>400ng/ml，阴性为<400ng/ml

** 与其他组比较，p<0.05

表2.  C-erbB-2表达与HCC临床病理间的关系

肿瘤特征

CD117染色

阴性例数

阳性例数

P值

肿瘤数目

1

51

10

2

18

6

≥3

29

13

>0.05

肿瘤直径

<3

24

11

(cm)

3~5

47

7

>5

27

11

<0.05**

门静脉癌栓

无

70

21

有

28

8

<0.05**

肿瘤分化程度

高

41

5

中

40

9

低

17

15

<0.05**

AFP*

阴性

36

12

阳性

62

17

>0.05

注：*  AFP阳性为>400ng/ml，阴性为<400ng/ml

** 与其他组比较，p<0.05

表3.  EGFR表达与HCC临床病理间的关系

肿瘤特征

CD117染色

阴性病例数

阳性病例数

P值

肿瘤数目

1

52

9

2

17

7

≥3

23

19

<0.05**

肿瘤直径

<3

24

11

(cm)

3~5

46

8

>5

22

16

>0.05

门静脉癌栓

无

67

24

有

25

11

>0.05

肿瘤分化程度

高

34

12

中

41

8

低

17

15

<0.05**

AFP*

阴性

24

24

阳性

68

11

<0.05**

注：*  AFP阳性为>400ng/ml，阴性为<400ng/ml

** 与其他组比较，p<0.05

讨  论

无论是采用传统手术切除还是肝移植治疗原发性肝癌都要面临术后肿瘤复发的问题，而肿瘤大小、数目、血管侵犯与否以及肿瘤生物学特性都与肿瘤复发密切相关，寻求新型的抗肿瘤药物是解决此问题的关键。近年来分子靶向药物为原发性肝癌的治疗提供了新手段，也是目前临床研究最活跃的领域之一，包括信号转导抑制剂、新生血管生成抑制剂、单克隆抗体和基因治疗等。CD117、C-erbB-2及EGFR在诱导细胞增殖、侵袭、转移和抑制凋亡等复杂的信号通路中具有重要作用，目前已证实作用于CD117 (C-kit) 靶点的药物可治疗慢性粒细胞白血病、胃肠道间质肿瘤(GIST)等[5]。C-erbB-2 (又称neu或HER-2) 的阳性表达与某些肿瘤的分化、淋巴结和远处转移相关[6]。EGFR与表皮细胞生长因子结合后可促进细胞分裂增殖，影响肿瘤血管及间质生长，促进肿瘤转移和复发。

我们的研究发现，CD117、C-erbB-2及EGFR在肝癌组织中的阳性表达与肿瘤的临床病理特点、进展与分化程度有关。在127例原发性肝癌组织中，CD117、C-erbB-2及EGFR的阳性表达率分别为32.3%、22.8%和27.6%，其中CD117阳性表达主要见于多发 ( 数目>3个)、体积较大 ( 直径> 5cm) 和门静脉癌栓的患者，C-erbB-2在较大肿瘤、合并门静脉癌栓或分化差的肝癌组织中阳性表达率较高，EGFR则与肿瘤数目、AFP水平和肿瘤分化程度明显相关。目前国际上肝癌分期多采用肿瘤大小、数目、有无血管侵犯等作为最重要的指标[7]，同时患者的预后与肿瘤直径、数目、恶性程度、血管侵犯等生物学特性密切相关。我们的研究发现，具有高侵袭性和低分化的肿瘤中表达CD117、C-erbB-2及EGFR，进一步证实上述物质在肝癌形成、发生和发展中起到重要作用；另一方面，针对上述物质在肿瘤中高表达的特点，选择适合的靶点药物有可能有效治疗肝癌，也为分子靶向药物的治疗提供理论依据。

有研究表明CD117表达与肝癌预后相关[8]，而针对EGFR的药物在小样本试验中可使高达59%的晚期肝癌患者病情得到控制[9]。近年来被欧盟药品监督管理局 (EMEA)、美国食品药品监督管理局 (FDA) 和我国食品药品监督管理局 (SFDA) 批准的索拉非尼 (Sorafenib, Nexavar)，其作用靶点中也与EGFR有关，可用于治疗不能手术切除的肝癌。目前针对乳腺癌、肺癌、白血病、胃肠间质瘤等的分子靶向药物在临床上得到大量应用，但治疗肝癌的靶向药物相对较少，我们的研究提示CD117、C-erbB-2及EGFR表达与肝癌的增殖、分化等生物学特性相关，有助于判断患者预后，有可能帮助指导靶向治疗的研究方向，当然在肝癌发生和发展过程中还有很多其他因子参与，其在肝癌发生发展中的具体作用也还存在一些争议[10,11]，如何清楚研究这些物质之间的相互作用，以及能否将其用于临床尚需更多的研究。

参考文献

[1] 杨帆, 周足力, 姜冠潮等. 肺癌中表皮生长因子受体过表达与女性、非吸烟、腺癌和基因突变的关系. 中华实验外科杂志, 2007, 8: 973-974.

[2] 王磊, 蔡永东, 王汉晋等. 乳腺癌细胞中表皮生长因子对雌激素受体表达的影响及机制.中华实验外科杂志, 2007, 6: 742-744.

[3] Lux ML, Rubin BP, Biase TL, et al. KIT extracellular and kinase domain mutations in gastrointestinal stromal tumors. Am J Pathol, 2000, 156: 791-795.

[4] Jeng YM, Lin CY, Hsu HC. Expression of the c-kit protein is associated with certain subtypes of salivary gland carcinoma. Cancer Lett, 2000, 154: 107-111.

[5] Verweij J, Judson I, Van Oosterom A. STI571: a magic bullet? Eur J Cancer, 2001, 37: 1816-1819.