1.无精子症患者的辅助生殖策略：OA（梗阻性无精症）患者选择治疗策略时必须重点考虑配偶年龄与生育力，据统计当女方年龄<30岁时每个ICSI周期活产率为46%，30~36岁时为34%，37~39岁时为13%，≥40岁时仅为4%［79］。因此，建议OA患者在配偶高龄或生育力明显下降时尽早行ICSI助孕。睾丸取精联合ICSI对于女方高龄或治疗窗口期短的患者是较好选择。

OA患者的睾丸与附睾来源精子ICSI助孕结局相当。荟萃分析显示睾丸与附睾来源的精子在ICSI助孕时活产率差异并无统计学意义，但附睾来源的精子具有更高的受精率与囊胚形成率［80］。此外，荟萃分析证实新鲜与冷冻睾丸来源精子行ICSI助孕时临床妊娠率差异无统计学意义，但新鲜比冷冻附睾来源精子行ICSI助孕时具有更高的临床妊娠率［81］。对于OA患者，无论是使用新鲜还是冷冻精子，ICSI成功率均无实质性差异，因此在ART治疗之前推荐进行精子冷冻保存［6］。

绝大多数NOA患者的治疗方案是基于ART，通过睾丸取精结合ICSI（第二代试管婴儿）可能使NOA（非梗阻性无精症）患者获得生物学子代。目前有多种取精方法，如micro-TESE、TESE、经皮睾丸穿刺取精术（testicular sperm aspiration，TESA）、经皮附睾穿刺取精术（percutaneous epididymal sperm aspiration， PESA）等。由于NOA病因复杂，其睾丸内的精子发生多为局灶性，micro-TESE与TESE相比可使NOA患者的获精成功率提高1.5倍［46］。如通过各种手段仍未获取到可用精子，建议采用精子库供精行助孕治疗或领养子女。

2.显微取精术中精子的实验室处理：应用先进的实验室技术对NOA患者获取的精子进行处理，对提高胚胎的受精率、优质胚胎率、囊胚形成率以及活产率都非常重要。

IVF实验室的专业技术人员在手术室处理睾丸组织并观察寻找精子，即刻向手术医生反馈有无精子、精子数量和质量是显微取精手术中非常重要的环节。实验室评估和手术有时需要交互进行，手术医生在手术显微镜下充分暴露睾丸小叶内的生精小管，选取粗壮、饱满、混浊的最可能含有精子的生精小管交给实验室人员。将所取得的每份睾丸组织转移到含有0.5 mL平衡液的细胞培养皿中，随后对组织进行机械性研磨，用倒置相差显微镜进行观察，并将观察情况告知手术医生。如果确认找到足够使用的精子，手术医生即可终止手术；反之，则继续寻找。如果在一侧睾丸未检出精子，根据具体病情可选择切开对侧睾丸，重复同样步骤［82］。

获取的精子可直接进行ICSI或冷冻保存，在多数研究中周期同步或非周期同步方案的最终生育结局没有明显差别。如果考虑冷冻过程中的精子数量丢失，可使用新鲜精子与周期同步进行ICSI，术前需要告知患者夫妇面临被动冻卵或供精的风险；如果进行冷冻保存，可采用微量精子冷冻或睾丸组织混悬液冷冻。由于大多数NOA患者手术获取的精子数量非常少，应尽量选取避免解冻后冷冻样本需要离心的方法［83-84］。无论是采用新鲜精子还是解冻后精子（于女方取卵日进行精子解冻复苏）进行ICSI，应选择活精子进行注射。如未检出，推荐使用茶碱或己酮可可碱进行挑选［81］。

七.

无精子症患者生育力保存

1.无精子症患者生育力保存适应证和选择：NOA患者以往只能选择供精来获得子代。然而，随着人类ART在生殖医学领域取得令人瞩目的发展，TESA/PESA/TESE或micro-TESE联合ICSI使无精子症患者有机会获得生物学子代［85］。临床上为避免无精子症患者ICSI周期失败而需重复进行显微取精手术，可将手术中获得的精子进行冷冻保存，后续需要时再复苏精子以供使用；也可降低取精手术当日取卵失败或周期妊娠失败带来的风险。因此，将这些显微取精术获得的微量精子进行冷冻保存是无精子症患者生育力保存的重要途径［86］。

广义上说，生育力保存适用于绝大部分通过手术获得微量睾丸/附睾精子的无精子症患者，但对于那些精神障碍、无自觉行为能力的人群以及有性传播疾病如艾滋病、梅毒、淋球菌感染者不适于做生育力保存。

Klinefelter综合征，也就是我们平常查出来基因是47，XXY这一类患者，患者在年轻时射出精液中可能存在精子，但会逐渐减少，甚至转为无精子症，因此可在患者刚进入青春期时冷冻保存精子［8］。另外，男性肿瘤患者在接受放化疗以后出现无精子症的情况很常见，临床上推荐此类患者提前进行生育力保存。如果可以获取射出精液中的精子，可直接进行冷冻保存。对于青春期前男性患儿，精子发生尚未启动，睾丸组织冻存可作为一种可行性策略，但该方法尚处于实验研究阶段。

2.稀少精子冷冻技术：严格意义上讲，正常或非严重少弱精子症的精液标本推荐常规冷冻，程序降温法和液氮熏蒸法均可使用。稀少精子冷冻技术主要针对无精子症以及严重少弱精子症患者从睾丸/附睾中获得的精子。此类精子数量极少且活力较弱，易受冷冻损伤影响，常规的冷冻方法并不适用［82］。因此，临床上亟需一种安全有效的稀少精子冷冻方法。

目前，已报道的稀少精子冷冻方法主要集中在不同载体冷冻法、不同保护剂冷冻法和组织冷冻法，如空卵膜载体冷冻法、微滴冷冻法、其他微型载体冷冻法、微流控芯片冷冻法、无卵黄或无渗透性保护剂冷冻法和睾丸组织冷冻法［87］。一些研究机构针对睾丸/附睾获取的精子，进行体外培养处理，然后根据精子的不同情况，采用不同冷冻载体（麦管或改良的微量超细管［88］）进行冷冻保存。冷冻方法可采用改良的一步熏蒸技术，加快了冷冻速率，减少了繁琐的程序降温流程，降低了冷休克或冰晶形成对精子造成的冷冻损伤。针对稀少精子冷冻后的复苏，也需要采用添加复苏培养液及严格的操作来减少复苏过程中对精子造成的损伤，从而提高稀少精子的冷冻复苏率。

总结，无精症治疗以及怀孕找一个靠谱的生殖中心非常重要，它不仅需要靠谱的手术手段，更需要实验人员以及胚胎师配合，一些民营医院的那些办法不可取！