我们知道结核分枝杄菌的免疫反应主要是通过T细胞介导的。T－SPOT．TB和PPD试验的原理就是通过相关抗原再次刺激，检测对结核分枝杆菌致敏的T细胞的存在。
T－SPOT．TB试验，采用的刺激抗原是结核分枝杄菌RD1区的特异性抗原：ESAT－6和CFP－10也就是大家熟悉的A孔和B孔抗原。这两个抗原在卡介苗菌株和绝大部分非结核分枝杄菌中都不存在，因此不容易产生交叉反应，特异性高。
而PPD试验，采用的是结核分枝杄菌纯蛋白行生物作为抗原进行体内刺激，由于抗原特异性差，与卡介苗和多种非结核分枝杆菌抗原存在交叉