急性睾丸炎起病往往比较急，还可以伴有腹部不适，恶心，呕吐等症状，也可以有发热、中毒症状。在青少年男性有这些症状之前，还可能有腮腺炎的症状；在前期有过性行为的男性青年中还要考虑到有性传播疾病的可能性。睾丸炎多数是单侧，有少部分是双侧。
体检发现患侧阴囊肿大，阴囊皮肤发红，水肿，睾丸有触痛，有的会合并轻度的鞘膜积液。
实验室检查手段有尿常规、尿培养，尿道分泌物检查可以发现有没有性传播疾病。睾丸超声波检查有助于排除睾丸肿瘤。磁共振检查可以作为二线方法，当诊断不确定时可以使用。最重要的鉴别诊断是睾丸扭转，尤其是在男性青少年当中。睾丸扭转在症状上与急性睾丸炎没有区别，多普勒超声可以发现睾丸血供情况，有着特别重要的意义。但是当睾丸扭转比较轻，或者是暂时性的睾丸扭转又恢复到正常位置时，超声波检查可能会错过睾丸扭转的诊断。